KeyTec® TR-FRET STK S1 kinase检测试剂盒可检测激酶相对活性水平。试剂盒中使用1种丝氨酸/苏氨酸激酶底物和一组通用检测试剂来测定激酶的相对活性。丝氨酸/苏氨酸激酶(Serine/threonine kinase, STK)家族成员众多,本试剂盒可兼容50种以上丝氨酸/苏氨酸激酶的活性测定。本试剂盒中使用了经过优化设计的生物素偶联多肽作为底物,可与KeyTec® TR-FRET HX*1偶联的链霉亲和素(Streptavidin - HX)结合;配合偶联了KeyTec® TR-FRET Solar Eu*2的phospho-STK*3 特异性抗体一起使用,即可通过检测被磷酸化底物的水平来评估酶的活性。
本试剂盒是运用KeyTec® TR-FRET技术开发的夹心型免疫分析方法,具有简单快速、特异性高、灵敏度高、重复性好等特点。基本步骤和原理如下图(图1)所示。第一步,酶反应阶段:在含有待测激酶和ATP的酶反应缓冲体系中,激酶将底物磷酸化。第二步,检测阶段:加入含有EDTA(终止酶反应)的特异性抗体与Streptavidin - HX即可检测磷酸化底物的水平。特异性识别磷酸化位点的抗体与磷酸化的底物结合、Streptavidin - HX与底物末端的生物素结合之后,从而使TR-FRET供体与受体相互靠近,在外部光源的激发下发生能量共振转移,产生TR-FRET信号;TR-FRET信号强度与磷酸化底物的量成正比。