KeyTec® TR-FRET Phospho-INSR β (Y1150∕Y1151) 检测试剂盒可检测细胞裂解后胞内磷酸化INSR β (Y1150/Y1151) 蛋白的水平。胰岛素受体 (Insulin Receptor,INSR) 是由两个α-亚基和两个β-亚基构成的跨膜糖蛋白,当胰岛素与受体胞外的α亚基结合后,引起受体胞内β亚基的酪氨酸位点(Y1150/Y1151)发生自磷酸化,随后通过磷酸化胰岛素受体底物蛋白(Insulin Receptor Substrate,IRS)激活下游的磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K),进而使蛋白激酶(Akt)上的丝氨酸以及苏氨酸位点被磷酸化激活,活化的Akt能引起许多与糖代谢相关的生物学效应。
本方法的基本原理如下图所示,一对特异性抗体分别偶联了KeyTec® TR-FRET Solar Eu*1与KeyTec® TR-FRET LA*2,一个可特异性识别磷酸化位点,另一个可识别该蛋白的其他表位;当两个抗体分别与磷酸化INSR β (Y1150/Y1151) 蛋白的不同表位结合时,TR-FRET供体与受体靠近到足够近的距离,在外部光源的激发下,供体与受体之间发生能量共振转移;检测特定波长(665 nm)的信号强度即可测定磷酸化INSR β (Y1150/Y1151) 蛋白的水平。