KeyTec® TR-FRET人源von Hippel−Lindau蛋白结合检测试剂盒可测定针对野生型人源von Hippel−Lindau (VHL) 蛋白的配体或抑制剂结合情况。本试剂盒是运用KeyTec® TR-FRET技术开发的竞争型免疫分析方法,具有简单快速、特异性高、灵敏度高、重复性好等特点。试剂盒中使用了带标签1的VHL/Elongin C/Elongin B蛋白复合体(Tag1-VHL/Elongin C/Elongin B protein complex, 后续使用缩写Tag1-VCB complex表示)和偶联了KeyTec® TR-FRET LA*1的VHL ligand (CAS# 1948273-02-6,可募集VHL蛋白,并可用于合成PROTAC,如MZ 1)。本试剂盒可用于VHL抑制剂或配体的高通量筛选与亲和力测定。
本方法的基本原理如下图所示,Solar Eu*2偶联的抗标签1(Tag1)抗体可特异性识别Tag1-VCB complex,LA*1偶联的VHL ligand可与VCB complex结合,从而使Solar Eu和LA相互靠近,在外部光源的激发下,供体与受体之间发生能量共振转移;检测特定波长(665 nm)的信号强度即可测定VHL ligand与VCB complex之间来的结合程度。当体系中无抑制剂或配体参与竞争时,信号最高;随着加入抑制剂或配体的浓度升高,信号逐渐降低;TR-FRET信号强度与抑制剂或配体的亲和力成反比。